在自動(dòng)低壓液相色譜方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中,采用等度洗脫時(shí),先洗脫組分的色譜峰峰寬較窄,后洗脫組分的色譜峰峰寬較寬;而梯度洗脫方式,則具有分析時(shí)間短(特別是對(duì)于樣品組分復(fù)雜的情況來(lái)說(shuō)),在梯度范圍內(nèi)各色譜峰的峰寬近乎一致等特點(diǎn)。
在化學(xué)發(fā)展中,化合物性能與結(jié)構(gòu)的確定有著重要的歷史地位,尤其是有機(jī)、高分子化合物結(jié)構(gòu)的確定更是影響著化學(xué)發(fā)展的進(jìn)程,所以說(shuō),液相色譜也有著同樣重要的歷史意義。液相色譜的出現(xiàn)、發(fā)展和過(guò)程直接影響著有機(jī)、高分子化合物的分離和分析,從而推動(dòng)了化學(xué)學(xué)科的發(fā)展。
自動(dòng)低壓液相色譜由輸出泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱 、梯度沖洗裝置、檢測(cè)器及數(shù)據(jù)處理和微機(jī)控制單元組成。輸出泵的功能是將沖洗劑在高壓下連續(xù)不斷地送入柱系統(tǒng),使混合物試樣在色譜中完成分離過(guò)程。常用的進(jìn)樣方式有3種:注射器隔膜進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。自動(dòng)低壓液相色譜的功能是將混合物中各組分分離。梯度沖洗又稱(chēng)溶劑程序,通過(guò)連續(xù)改變沖洗劑的組成,改善復(fù)雜樣品的分離度,縮短分析周期和改善峰形,其功能類(lèi)似于氣相色譜中的程序升溫。檢測(cè)器的功能是將從色譜柱中流出的已經(jīng)分離的組分顯示出來(lái)或轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號(hào),自動(dòng)低壓液相色譜主要有紫外吸收檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器和折光示差檢測(cè)器,其中以紫外吸收檢測(cè)器使用zui廣?,F(xiàn)代化的儀器都配有計(jì)算機(jī),以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)處理數(shù)據(jù)、繪圖和打印分析報(bào)告。
基質(zhì)或者樣品組分比較復(fù)雜時(shí),自動(dòng)低壓液相色譜zui常用的操作模式,而主要在梯度洗脫中出現(xiàn)的鬼峰是特別讓人頭疼的。有可能由于來(lái)源排查不清以及解決方案不到位而導(dǎo)致原來(lái)的方法在實(shí)際的應(yīng)用與轉(zhuǎn)移過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題,甚至面臨重新開(kāi)發(fā)方法的尷尬境地。鬼峰意即來(lái)源不清,不可指認(rèn),時(shí)有時(shí)無(wú),對(duì)目標(biāo)峰或者樣品純度測(cè)試產(chǎn)生干擾作用的峰,即為典型的鬼峰,一般來(lái)講,鬼峰的出現(xiàn)與色譜柱無(wú)關(guān)(當(dāng)然,梯度洗脫時(shí),梯度設(shè)置不合適的情況除外)。
自動(dòng)低壓液相色譜對(duì)于含量或者純度檢測(cè)方法而言,在主峰位置或附近出現(xiàn)鬼峰的話,影響到方法的專(zhuān)屬性以及檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。特別地,對(duì)于藥物制劑或者API的純度測(cè)試來(lái)說(shuō),自動(dòng)低壓液相色譜要求對(duì)降解產(chǎn)生的雜質(zhì)之外的雜質(zhì)來(lái)源做出較詳細(xì)的說(shuō)明(如反應(yīng)副產(chǎn)物或者反應(yīng)原料帶入等)。鬼峰的出現(xiàn),可能增加此項(xiàng)工作的難度與工作量。